折射仪江苏协诚仪表医用血清蛋白浓度计
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价 格 ¥200
所 在 地 山东省 德州市
发布日期 2019-07-31 00:48:36
考马斯亮蓝法测定牛血清蛋白的标准曲线?
一、原理 考马斯亮蓝G-250(Coomassie G-250)是一种甲基取代的三苯基甲烷,分子中磺酸基的蓝色染料,在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质—考马斯亮蓝复合物蓝色溶液,引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移,在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收,因此,可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质—考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定,适合于蛋白质类的定量分析,尤其适合于稀有蛋白质的微量分析。 考马斯亮蓝G-250试剂呈色反应颜色稳定、灵敏度高,最低测试蛋白质量在1ug左右。 二、操作步骤 1. 标准曲线测定法 分别取六只试管,其中一只加入1.0ml蒸馏水做空白,5只分别加入不同体积的浓度为100ug/ml牛血清清蛋白标准液,补充水到1.0ml。然后每只试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂,摇匀放置5min,在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。以A595吸光值为纵坐标,牛血清清蛋白的ug数量为横坐标绘制标准曲线。具体操作见下表。 蛋白质标准曲线测定加样 试剂 空白 1 2 3 4 5 100ug/ml牛血清清蛋白/ml 1.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 牛血清清蛋白/ug 0 10 20 40 60 80 去离子水/ml 0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 考马斯亮蓝G-250试剂/ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 吸光值A595 2. 蛋白样品 配制浓度约100ug/ml的待测蛋白质溶液。取一只试管加入1.0ml蒸馏水做空白,一支加入0.5ml待测蛋白质溶液,补充水到1.0ml。然后每支试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂,摇匀放置5min后,在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。用测得的吸光值从标准曲线上查得相当于牛血清清蛋白的ug数量,计算出待测蛋白质的含量。 在标准蛋白质和蛋白质样品的测定时,为了减小误差,每一个浓度的蛋白质做3支平行管。 3.试剂配置 a.牛血清清蛋白标准液 结晶牛血清清蛋白或酪蛋白,预先经微量凯氏定氮法标定该蛋白质的百分含量或者根据牛血清清蛋白的消光系数是6.6来计算其百分含量。然后根据该蛋白的纯度配置成浓度为100 ug/ml的蛋白溶液。 b.考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇,加入100ml质量浓度为0.85g/ml的磷酸,作为母液保存,使用时用水稀释到1000ml。试剂的最终浓度为0.01%考马斯亮蓝G-250、质量浓度为0.085g/ml磷酸。
牛血清蛋白(BSA),牛血清蛋白(第五组分)之间有什么区别?
“第五组分” 是 牛血清蛋白的一个级别。 牛血清蛋白等级 从低到高 : 牛血清白蛋白, 牛血清白蛋白第五组分, 牛血清白蛋白(无必须脂肪酸), 牛血清白蛋白(无蛋白酶), 牛血清白蛋白(细胞培养级), 金标级牛血清白蛋白, 交联牛血清白蛋白 就是说 越往后的 蛋白 品质越高,当然价钱也越贵。 你说的牛血清蛋白(BSA)中的BSA 就是“牛血清蛋白”的英文缩写简称。 BSA 不是一种型号。以上是原创
血清蛋白的分离方法
血清脂蛋白是由血液中脂质与某些特异的蛋白质组成的一类不均一的复合物。因其所含脂与载脂蛋白的比例不同,其密度范围在0.96g/ml或更低至1.21g/ml之间。纸电泳中显示四条带即:乳密颗粒,极低密度脂蛋白,低密度脂蛋白,高密度脂蛋白。每种脂蛋白还可以分为更多的亚组分。用电泳法分离含载脂蛋白较高的组份(HDL,VHDL)比较成功,而离心分离法则适合用于各种密度的血清脂蛋白分离。一.梯度材料:血清脂蛋白密度较低,常用的梯度材料为Nacl,NaI,Kbr,KI等,常用的缓冲剂为ED。二.预分离:1. 血细胞与血清分离:离心参数:全血,角转头,3,000rpm*20min结果:沉淀为血细胞,上部为血清。2. 乳糜粒分离:禁食12小时以上人血浆中乳糜粒含量极少,已进食者因其血浆含乳糜粒高,应先离心去除乳糜粒。离心参数:4 *10 (g*min),10°C.各种转头转速均可。梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0。5MnaCl+0.3MEDTA,ph7.4结果:乳糜粒上浮,吸出。3. 血清蛋白分离:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质。离心参数:(2。5-3)*10 (g* hr), 各种转头均可。如角转头70,000rpm* 6hrs,10°C配置:管容量1/3为血清,2/3为1。31g/ml,NaCl+NaBr,搅拌后终密度为1。21g/ml结果:管上部1/6容积为血清脂蛋白,下部5/6为其它蛋白。三. 方法:1. 顺序浮选法:a) 超速法:最早使用的方法,4000rpm*24hrs*3次,10°CNaCl+NaBr梯度按1。006,1。063,1。21顺序浮选,每次在管上部取出不同密度之脂蛋白。操作简单,分辨率高,得率高,费时,成本高。b) 超高速法:100,000rpm*2.5hrs*2次,10°C,100,000rpm*4hrs*1次,NaCl+KBr+EDTA梯度按不含密度浮选出VLDL ,LDL,HDL2. 单次离心法:a) 单次甩平分离用最高转速为25,000~28,000 rpm,6*40ml甩平转头以1.006g/mlNaCl液及1。35g/ml(NaCl+KBr+EDTA)液配置成从1。006至1。21的8层不连续阶梯度,最下部用血清与KBr配成1。25g/ml样品液,25,000rpm*4hrs,4oC一次得到VLDL,LDL,HDL不同层区带。用最高转速为40,000 rpm ,6*13ml甩平转头,40,000rpm*24hrs,20°C,不连续KBr梯度1.006~1.21g/ml,细长管,分层清晰,回收率高,离心时间长b) 单次垂直管分离:NaCl/KBr或NaCl/NaBr不连续梯度单管容量从5ml到40ml,转速从50,000 rpm~80,000rpm,离心(0。5-3)hrs,下层用KBr或(NaBr)将血清调至1。3g/ml上层用1.006g/ml,NaCl液,10°C-20°C,增加,减速一次分出。NaCl/Sucrose不连续梯度下层为48%W/W Sucrose,中层血清在4MnaCl中,上层为0。67MNaCl+0.05% EDTA,离心参数同上,时间较长。c) 区带转头大容量分离:离心参数:区带转头,最高转速30,000~48,000rpm,容量从650ml~1900ml,每次可分离血清50-150ml,低速加样及卸载,分离转速:大转头(25,000-28,000rpm)*24hrs,小转头(30,000-38,000rpm)*1hrs,10°C-20°C梯度液:NaCl+NaBr或KBr+EDTA不连续或线性梯度,样品在最大密度层,近转头核心处用纯水做隔离层,分离室最外部用高密度NaCl/KBr或NaCl/NaBr作缓冲层。
注册号: | 91371482334607689P |
组织机构代码: | 33460768-9 |
税务登记证号: | 91371482334607689P |
法定代表人: | 田振勇 |
经营状态: | 开业 |
成立日期: | 2015-03-11 |
营业期限: | 2015-03-11 至 2025-03-11 |
年检日期: | 2017-07-26 |
注册资本: | 100万(元) |
企业类型: | 有限责任公司(自然人独资) |
机构类型: | 企业法人 |
所属行业: | 其他未列明批发业 |
行政区划: | 山东省德州市禹城市 |
电话号码: | 180****1232 |
登记机关: | 禹城市市场监督管理局 |
所在地址: | 山东省德州市禹城市商贸港第二期D栋D-56-57、D-16号 |
经营范围: | 光学仪器、电子仪器生产、销售;货物进出口业务(不含出版物进口)。(依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动) |