苏云金芽孢杆菌芽孢染色绘图 芽孢染色法

2021-05-09 03:25:34 来源：朵拉利品网

1, 芽孢染色法

一、目的要求
学习并掌握芽孢染色法。
二、基本原理
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。
三、器材
枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）;
孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。
四、操作步骤
方法1、
(1)将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
(2)滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
(3)用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必e68a847a686964616f31333234303761要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7.6%）染10分钟。
(4)倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
(5)用番红水溶液复染1分钟，水洗。
(6)待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
方法2、
(1)取二支洁净的小试管，分别加入0.2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。
(2)在菌悬液中分别加入0.2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。
(3)用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95%乙醇冲洗至无红色液流出。
(4)再用自来水冲洗，滤纸吸干。
(5)取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
五、实验报告
1.结果
绘图表示你观察到的两种芽孢杆菌的芽孢在形状、大小、着生位置上有什么不同？
2.思考题
为什么在孔雀绿染色液加热染色中，要待玻片冷却后才能用水冲洗？

2, 苏云金芽孢杆菌的所有知识点

病原形态特征
在牛肉膏蛋白胨固体培养基上30℃条件下培养，不同时间取样，染色后显微镜下观察。B-Hm-16营养体细胞为杆状，较为粗壮，大小为1. 2~1. 5μm*3. 6~4. 5μm；培养30h可形成较营养体更为粗壮的芽孢囊，染色后可以看到一端着深红色，另一端不着色；培养36~38h芽孢囊破裂，释放出卵圆形的孢和钝菱形的晶体，晶体大小为1. 0~1. 2μm*1~2. 0μm。[
生理生化特征
苏云金芽孢杆菌WY-197在LB液体培养基中生长良好，可正常产生芽孢和伴孢晶体，平均生长周期为24 h。其中1~8 h为潜伏期，pH值基本不变；8~12 h为对数生长期，pH值迅速下降、到对数末期又迅速回升；12~18 h为孢子囊发育期，pH缓慢上升；18~24 h为芽孢形成期，随着芽孢和晶体逐渐脱落，pH值上升至最高，但在伴孢晶体完全脱落后，pH值略有下降。
生防特点
苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）是目前产量最大、使用最广的生物杀虫剂。它的主要活性成分是一种或数种杀虫晶体蛋白（insecticidal crystal proteins,ICPs），又称δ-内毒素，对鳞翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目、同翅目等昆虫，以及动植物线虫、蜱螨等节肢动物都有特异性的毒杀活性，而对非目标生物安全因此，Bt杀虫剂具有专一、高效和对人畜安全等优点目前苏云金杆菌商品制剂已达100多种，是世界上应用最为广泛、用量最大、效果最好的微生物杀虫剂，因而倍受人们关注。但是，商品Bt制剂在生产防治中也显示出某些局限性，如速效性差、对高龄幼虫不敏感、田间迟效期短以及重组工程菌株遗传性状不稳定等都已成为影响Bt进一步成功推广使用的制约因素。因此，为了提高Bt制剂的杀虫效果，对其增效途径的研究已成为世界性的研究热点，主要包括：筛选增效菌株；利用化学添加剂、植物它感素、几丁质酶作为增效物质；昆虫病原微生物间的互作增效等。

名词解释

芽孢

芽孢（英文名：spore），是某些特殊种群的细菌，主要是芽孢杆菌属Bacillus与梭菌属Clostridium中细菌产生的特殊休眠体，有极强的抗逆性，对热、碱、酸、高渗以及辐射均有强耐受性。普通的巴斯德消毒法无法杀灭芽孢，通常使用的杀灭芽孢的方法为高压灭菌。一个细菌产生一个芽孢，条件适宜时重新成为一个细菌，数量没有增加，因此芽孢不是细菌的繁殖体。

孔雀绿

孔雀绿亦称“法翠”，也叫翡翠釉或吉翠釉。釉色分深浅两种。在陶瓷彩釉方面，孔雀绿是一种以铜为着色剂的低温色釉，宋、元时期的民窑创烧，最早见于宋代磁州窑。

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