茚三酮法测定氨基酸 茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤？

2021-04-19 22:31:06 来源：朵拉利品网

1, 茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤？

茚三酮显色法步骤：
1.标准曲线的制作 分别取0.3mmol/L 的标准氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL 于试管中，用水补足至1mL。各加入1mL pH5.4,2mol/L 醋酸缓冲液；再加入1mL 茚三酮显色液，充分混匀后，盖住试管口，在100℃水浴中加热15min，用自来水冷却。放置5min 后，加入3mL60%乙醇稀释，充分摇匀，用分光光度计测定OD570nm。（脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色，应测定OD440nm）。
以OD570nm 为纵坐标，氨基酸含量为横坐标，绘制标准曲线。
实验室培养箱（CO2 培养箱） 生物帮上面有这方面的详细的介绍。

2, 茚三酮比色法 氨基酸含量的测定

去百度文库，查看完整内容>
内容来自用户：fc357893792
茚三酮显色法测定氨基酸含量
原理
茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。试剂与材料
1.标准氨基酸溶液：配制成0.3mmol/L溶液。
2.pH5.4,2mol/L醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。用pH检查校正。
3.茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮，用10mL乙二醇甲醚溶解。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g茚三酮溶于15~25mL热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻搅拌。加热30min后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取5g茚三酮，用125mL沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL乙二醇甲醚中加入5g硫酸亚铁，振荡1~2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为以

名词解释

茚三酮

茚三酮，近似为白色结晶，或浅黄色结晶粉末，微溶于乙醚及三氯甲烷，100℃以上变为红色。用于鉴定氨基酸，反应十分灵敏，是鉴定氨基酸的最简便方法。

培养箱

培养箱，具有制冷和加热双向调温系统，温度可控的功能，是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等科研，教研`教育部门不可缺少的实验室设备，广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等等。

• 上一篇 茚三酮反应原理 氨基酸与茚三酮反应原理
• 下一篇 标准硫酸铁铵溶液 硫酸铁铵标准溶液配制的详细过程？