茚三酮法测氨基酸标准曲线 茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤？

2021-04-19 22:30:06 来源：朵拉利品网

1, 茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤？

茚三酮显色法步骤：
1.标准曲线的制作 分别取0.3mmol/L 的标准氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL 于试管中，用水补足至1mL。各加入1mL pH5.4,2mol/L 醋酸缓冲液；再加入1mL 茚三酮显色液，充分混匀后，盖住试管口，在100℃水浴中加热15min，用自来水冷却。放置5min 后，加入3mL60%乙醇稀释，充分摇匀，用分光光度计测定OD570nm。（脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色，应测定OD440nm）。
以OD570nm 为纵坐标，氨基酸含量为横坐标，绘制标准曲线。
实验室培养箱（CO2 培养箱） 生物帮上面有这方面的详细的介绍。

2, 求助 在用茚三酮法做氨基酸标准曲线时 为什么没有颜色呢？或者颜色...

可能原因：
1、标准氨基酸含量太低
2、反应温度未达到
3、反应后未及时测量，搁置太久
1 茚三酮配制：称0.6g茚三酮，加入15毫升正丙醇，溶解。再加入30毫升正丁醇，60毫升乙二醇，最后加入PH5。4的乙醇-乙酸钠缓冲液9毫升，混匀，4摄氏度棕色试剂瓶保存，可保存十天。
2 PH5。4的乙醇-乙酸钠缓冲液：54。4克乙酸钠加入100毫升无氨蒸馏水，加热至沸腾，使体积蒸发至60毫升左右。冷却，加入30毫升冰醋酸，用无氨蒸馏水定容至100毫升。
3 氨基酸标液：称80摄氏度烘干的亮氨酸46。8毫克，用10%异丙醇定容至100毫升，为1毫摩尔/升的标准氨基酸储备液，冰箱保存。从中取5毫升，蒸馏水定容至50毫升，为5微克/毫升氨基酸标准液。
4 氰化钠储备液：称取490毫克，溶于一升无氨蒸馏水，为0。01摩尔/升。
5 10%乙酸
6乙酸-氰酸盐缓冲液：0。01摩尔/升氰化钠20毫升，用乙醇-乙酸钠缓冲液定容至一升。
7标线
管号 1 2 3 4 5 6
氨基液标液（毫升）0 0。2 0。4 0。6 0。8 1
无氨蒸馏水（毫升）2 1。8 1。6 1。4 1。2 1
茚三酮（毫升） 3 3 3 3 3 3
乙酸-氰酸盐缓冲液 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5
每管游离氨基酸含量（微克）
0 1 2 3 4 5
加完试剂后，沸水中加热15分钟，取后后迅速冷却，并不时摇动，呈现蓝紫色时，用60%乙醇定容至20毫升。摇匀，570纳米测定吸光度。
计算：
含量（微克/100克）=C*VT*100/(VS*W)
C：从标线上查得的含量 微克
VT：样品总体积 毫升
VS：测定时取用的样品体积 毫升
W：样品鲜重 克

3, 茚三酮比色法 氨基酸含量的测定

去百度文库，查看完整内容>
内容来自用户：fc357893792
茚三酮显色法测定氨基酸含量
原理
茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。试剂与材料
1.标准氨基酸溶液：配制成0.3mmol/L溶液。
2.pH5.4,2mol/L醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。用pH检查校正。
3.茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮，用10mL乙二醇甲醚溶解。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g茚三酮溶于15~25mL热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻搅拌。加热30min后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取5g茚三酮，用125mL沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL乙二醇甲醚中加入5g硫酸亚铁，振荡1~2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为以

名词解释

茚三酮

茚三酮，近似为白色结晶，或浅黄色结晶粉末，微溶于乙醚及三氯甲烷，100℃以上变为红色。用于鉴定氨基酸，反应十分灵敏，是鉴定氨基酸的最简便方法。

溶液

溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物，被分散的物质（ 溶质）以分子或更小的质点分散于另一物质（溶剂）中。物质在 常温时有固体、液体和气体三种 状态。因此溶液也有三种状态，大气本身就是一种气体溶液， 固体溶液混合物常称固溶体，如合金。一般溶液只是专指液体溶液。液体溶液包括两种，即能够导电的 电解质溶液和不能导电的 非电解质溶液。所谓 胶体溶液，更确切的说应称为 溶胶。其中，溶质相当于 分散质，溶剂相当于分散剂。在生活中常见的溶液有蔗糖溶液、碘酒、澄清石灰水、稀盐酸、盐水、空气等。

5g

5G，别称5G技术，是指第五代移动通信技术、蜂窝移动通信技术，中国三大运营商于2019年11月1日上线5G商用套餐。 5G的核心是表示声音和图像的模拟信号在手机中被数字化，由模数转换器转换并作为比特流传输，主要优势在于数据传输速率高，可满足高清视频、虚拟现实等大数据量传输。

• 上一篇 茚三酮反应的物质结构基础 氨基酸与茚三酮反应原理
• 下一篇 茚三酮是什么颜色 水合茚三酮是什么颜色的,遇蛋白质呈什么颜色？