中性红染色液的配制 结晶紫染液、番红染液如何配制？

2021-04-13 03:09:19 来源：朵拉利品网

1, 结晶紫染液、番红染液如何配制？

1、结晶紫染液：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中）20mL,1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。
2、番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
结晶紫染液、番红染液都是革兰氏染色液的两种主要试剂，革兰氏染色剂不仅用来观察细菌的形态，而且它还是细菌鉴定的重要方法，它可将全部细菌区分别革兰氏阳性菌和阴性菌两大类。
一、革兰氏染色法的步骤为：
涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。
二、结晶紫染色法测定细胞数
1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5*104~10*4 WEHI-164细胞的培养液（含10%小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2~3小时，让细胞帖壁。
2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3~5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。
对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔各加100μl RPMI-1640培养液。继续培养18~24小时。
3、甩去培养液，用PBS小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定细胞30秒钟。
4、吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml结晶紫染液，室温中放置20分钟。
5、轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室温中长期保存。
6、测定前，每孔加0.1ml 33%醋酸脱色，充分振荡后在570nm处测定光吸收度。用光吸收度（OD）值对样品稀释度作图，比较标准品曲线和待检样品曲线即可得到待测样品中的细胞因子活性
参考资料：百度百科—番红
参考资料：百度百科—结晶紫染液

2, 苏木精 曙红染色液的配置

Delafield 苏木精
材料：苏木素4g、无水酒精25ml、10%铵矾水溶液400ml、甘油100ml、甲醇100ml、蒸馏水
配置方法：（1）取10g铵矾溶于90ml蒸馏水中，即成10%铵矾水溶液；
(2)取苏木精4g溶于无水酒精25ml;
(3)溶化后加10%铵矾水溶液400ml，放有光处3-4天；
(4)滤过后加甘油及甲醇各100ml，过滤数日后可长久保存。
用法：一般用蒸馏水稀释50-100倍，染4-24小时，后流水洗。

名词解释

蒸馏水

蒸馏水是指经过蒸馏、冷凝操作的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。 蒸馏水的制作是把源水煮沸后令其蒸发冷凝回收，要大量耗费热能，造价不会太低。

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