蛋白上样缓冲液的选择 SDSPAGE上样缓冲液成分有哪些？各有何作用

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2020-12-04 07:50:45 来源：朵拉利品网

1, SDSPAGE上样缓冲液成分有哪些？各有何作用

4*和5*的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。
4*上样缓冲液使用方法：
1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例（4倍稀释）来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。
2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。
3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。
5*上样缓冲液使用方法：
1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液（5X）。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
2. 按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液（5X）的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液（5X）。
3. 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。
4. 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

2, 凝胶电泳中,使用上样缓冲溶液的目的是什么？请简要回答

5*SDS-PAGE Loading Buffer的配制（10 ml）
（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）
组分：Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS (2%)；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4 mM）
配制过程：
1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 0.6 ml;50%的甘油5 ml;10%的SDS溶液2 ml;1%的溴酚兰1 ml;
2. 加入去离子水定容至10 ml;
3. 分装；
4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。
你还可以参考下面这个配方：
2*SDS凝胶加样缓冲液组分（摘自《分子克隆》第三版）
Tris-HCl pH6.8(100 mM);SDS (4%)；溴酚兰（0.2%）；甘油（20%）；β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（200 mM）
不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。β-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。

名词解释

ml

ML，monolayer的缩写，是覆盖度的单位。

SDS

抑郁自评量表（Self-ratingdepressionscale，SDS）是含有20个项目，分为4级评分的自评量表，原型是W.K.Zung编制的抑郁量表（1965年）。其特点是使用简便，并能相当直观地反映抑郁患者的主观感受及其在治疗中的变化。主要适用于具有抑郁症状的成年人，包括门诊及住院患者。但对严重迟缓症状的抑郁，评定有困难。同时，SDS对于文化程度较低或智力水平稍差的人使用效果不佳。

mM

mm即毫米的英文缩写，又称公厘（或公釐），是长度单位和降雨量单位。1毫米等于千分之一米，或十分之一厘米。