蛋白电泳上样缓冲液电泳实验中什么叫上样缓冲液

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2020-12-04 07:50:03 来源：朵拉利品网

1, 电泳实验中什么叫上样缓冲液

loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液，6kb的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫蓝色的条带是溴酚蓝，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同。
后面的蓝色条带是二甲苯氰，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。
pH计算
提到
这就是Henderson-Hasselbalch方程。
值得注意的是，式子中酸及其共轭碱的浓度都是平衡时的浓度，除了酸性过于强的情况下，由于同离子效应的存在，一般都可用此式计算，
根据此式可得出下列几点结论：
1、缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数Ka及盐和酸的浓度有关。弱酸的pKa值衡定，但酸和盐的比例不同时，就会得到不同的pH值。酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PKa值相同。
2、酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不变。
3、酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，缓冲液的一般有效缓冲范围为pH=pKa±1,pOH=pKb±1。
配制方法
只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。
只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nm pH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升（1M=1 mol/L），而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml 0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
参考资料来源：百度百科-缓冲溶液
参考资料来源：百度百科-上样缓冲液

2, sds电泳上样缓冲液如何配置

5*SDS-PAGE Loading Buffer的配制（10 ml）
（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）
组分：Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS (2%)；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4 mM）
配制过程：
1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 0.6 ml;50%的甘油5 ml;10%的SDS溶液2 ml;1%的溴酚兰1 ml;
2. 加入去离子水定容至10 ml;
3. 分装；
4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。
你还可以参考下面这个配方：
2*SDS凝胶加样缓冲液组分（摘自《分子克隆》第三版）
Tris-HCl pH6.8(100 mM);SDS (4%)；溴酚兰（0.2%）；甘油（20%）；β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（200 mM）
不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。β-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。

名词解释

缓冲液

缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时大大降低pH变动幅度的溶液，弱酸及其盐的混合溶液（如HOAc与NaOAc），弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲液。其作用是保持溶液PH值的稳定，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响。

pH

氢离子浓度指数（hydrogen ionconcentration）是指溶液中氢离子的总数和总物质的量的比。一般称为“pH”，而不是“pH值”。氢离子活度指数的测定，定性方法可通过使用pH指示剂、pH试纸测定，而定量的pH测量需要采用pH计来进行测定。

配制

配制，是汉语词汇，读音Pèizhì，解释为为配合主体而制作。