wb的上样缓冲液 WB上样缓冲液加加多少是怎么确定的

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2020-12-04 07:49:00 来源：朵拉利品网

1, WB上样缓冲液加加多少是怎么确定的

loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液，6kb的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫蓝色的条带是溴酚蓝，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同。
后面的蓝色条带是二甲苯氰，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。
pH计算
提到
这就是Henderson-Hasselbalch方程。
值得注意的是，式子中酸及其共轭碱的浓度都是平衡时的浓度，除了酸性过于强的情况下，由于同离子效应的存在，一般都可用此式计算，
根据此式可得出下列几点结论：
1、缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数Ka及盐和酸的浓度有关。弱酸的pKa值衡定，但酸和盐的比例不同时，就会得到不同的pH值。酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PKa值相同。
2、酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不变。
3、酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，缓冲液的一般有效缓冲范围为pH=pKa±1,pOH=pKb±1。
配制方法
只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。
只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nm pH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升（1M=1 mol/L），而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml 0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
参考资料来源：百度百科-缓冲溶液
参考资料来源：百度百科-上样缓冲液

2, 电泳实验中什么叫上样缓冲液

>这要根据你做的蛋白表达量多少，一般是用DAB显色要50-100μg，用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg,ecl法至少20pg。我也用组织作过western，蛋白浓度的确很高。
通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，可用裂解液稀释蛋白使总上样体积在10ul即可，勿用水稀释会改变PH值。
上样不要过高，否则条带兜一大坨，不好看。
具体还得在试验后确定，如果内参出来，目的蛋白不出来，可能表明目的蛋白丰度低，上样量相对不足可在增加上样量试试。
当然目的蛋白不出来的原因有很多：）这只是从上样的角度考虑。好的，多谢我前几天预示了一下，倒是有条带，我我算了一下就150-160μg，请问一下各位，加这么高的量可以吗？关键是你自己分析一下你底预实验结果，最后得到清晰而不太浓密底条带最好。其实WB控制最后显示底条带不仅可以控制上样量，还可以控制WB整个过程中底许多环节，所以不要怕试，多做几次浓度剃度底预实验，比在后面老是瞎作一气好。还有具体多少量确实别人也不能帮你回答。上多少没关系，关键是能上得去，并且跑出来有条带。如果只在160ug能做出来就用160ug.

名词解释

缓冲液

缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时大大降低pH变动幅度的溶液，弱酸及其盐的混合溶液（如HOAc与NaOAc），弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲液。其作用是保持溶液PH值的稳定，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响。

pH

氢离子浓度指数（hydrogen ionconcentration）是指溶液中氢离子的总数和总物质的量的比。一般称为“pH”，而不是“pH值”。氢离子活度指数的测定，定性方法可通过使用pH指示剂、pH试纸测定，而定量的pH测量需要采用pH计来进行测定。

配制

配制，是汉语词汇，读音Pèizhì，解释为为配合主体而制作。