1×sds上样缓冲液 SDS上样缓冲液（5*）作用是什么

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2020-12-04 07:48:00 来源：朵拉利品网

1, SDS上样缓冲液（5*）作用是什么

5*SDS-PAGE Loading Buffer的配制（10 ml）
（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）
组分：Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS (2%)；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4 mM）
配制过程：
1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 0.6 ml;50%的甘油5 ml;10%的SDS溶液2 ml;1%的溴酚兰1 ml;
2. 加入去离子水定容至10 ml;
3. 分装；
4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。
你还可以参考下面这个配方：
2*SDS凝胶加样缓冲液组分（摘自《分子克隆》第三版）
Tris-HCl pH6.8(100 mM);SDS (4%)；溴酚兰（0.2%）；甘油（20%）；β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（200 mM）
不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。β-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。

2, 请教：2*SDS上样缓冲液的配法

loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液，6kb的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫蓝色的条带是溴酚蓝，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同。
后面的蓝色条带是二甲苯氰，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。
pH计算
提到
这就是Henderson-Hasselbalch方程。
值得注意的是，式子中酸及其共轭碱的浓度都是平衡时的浓度，除了酸性过于强的情况下，由于同离子效应的存在，一般都可用此式计算，
根据此式可得出下列几点结论：
1、缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数Ka及盐和酸的浓度有关。弱酸的pKa值衡定，但酸和盐的比例不同时，就会得到不同的pH值。酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PKa值相同。
2、酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不变。
3、酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，缓冲液的一般有效缓冲范围为pH=pKa±1,pOH=pKb±1。
配制方法
只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。
只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nm pH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升（1M=1 mol/L），而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml 0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
参考资料来源：百度百科-缓冲溶液
参考资料来源：百度百科-上样缓冲液

名词解释

ml

ML，monolayer的缩写，是覆盖度的单位。

SDS

抑郁自评量表（Self-ratingdepressionscale，SDS）是含有20个项目，分为4级评分的自评量表，原型是W.K.Zung编制的抑郁量表（1965年）。其特点是使用简便，并能相当直观地反映抑郁患者的主观感受及其在治疗中的变化。主要适用于具有抑郁症状的成年人，包括门诊及住院患者。但对严重迟缓症状的抑郁，评定有困难。同时，SDS对于文化程度较低或智力水平稍差的人使用效果不佳。

mM

mm即毫米的英文缩写，又称公厘（或公釐），是长度单位和降雨量单位。1毫米等于千分之一米，或十分之一厘米。