上样缓冲液含有DTT 请教上样缓冲液配方中DTT的用法

2020-12-04 07:47:24 来源：朵拉利品网

1, 请教上样缓冲液配方中DTT的用法

（以下内容仅供参考）
2乘SDS-PAGE上样缓冲液（20ml体系）
1.0mol/L Tris-HCL (pH 6.8) 2ml
1.0mol/L DTT 4ml
SDS 0.8g
溴芬蓝 0.04g
甘油 4ml
dd水 定容至20ml
4℃冰箱保存，可以不分装，我们实验室一般用三个月以上
先配1.0mol/L的DTT，双蒸无菌水溶解4℃冰箱保存，配上样缓冲液的时候加入就可以了，都混匀保存也没问题的

2, 请教上样缓冲液配方中DTT的用法

DTT在水溶液的半衰期恰好是3-5天，β-ME的更短，只有几十个小时。
普通的SDS-PAGE是还原变性胶，如果loading buffer在4度放置时间较长（>1 week），用来上样的话，就等于做非还原变性胶。
对于普通的蛋白来讲，分子内二硫键很少或者干脆没有，用陈旧的loading buffer和新的loading buffer（临用前补加还原剂）没有什么区别。
如果你的蛋白巯基较多，而且暴露在分子表面，容易氧化形成分子间二硫键，上述两种胶就有很大区别，有可能看见比正常条带大一到几倍的杂带，

名词解释

mol

摩尔（mole），简称摩，旧称克分子、克原子，符号为mol，是物质的量的单位，是国际单位制7个基本单位之一。每1摩尔任何物质（微观物质，如分子，原子等）含有阿伏加德罗常量（约6.02×10²³）个微粒。使用摩尔时基本微粒应予指明，可以是原子、分子、离子及其他微观粒子，或这些微观粒子的特定组合体。 约6.02×10²³个就是1摩尔，就好比人们常说的一打就是指12个，“摩尔”和“打”一样只是一种特殊的单位量。0.012kg（12克） ¹²C（碳12)所包含的原子个数就是1摩尔。 2018年11月16日 ，第26届国际计量大会通过“修订国际单位制”决议，正式更新包括国际标准质量单位“千克”在内的4项基本单位定义。新国际单位体系采用物理常数重新定义质量单位“千克”、电流单位“安培”、温度单位“开尔文”和物质的量单位“摩尔”。

缓冲液

缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时大大降低pH变动幅度的溶液，弱酸及其盐的混合溶液（如HOAc与NaOAc），弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲液。 其作用是保持溶液PH值的稳定，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响。

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