石蜡包埋切片制作法石蜡包埋切片有几个步骤？

知识中心

您的位置：朵拉利品网 > 知识中心 > 石蜡包埋切片制作法石蜡包埋切片有几个步骤？

2020-06-20 02:41:59 来源：朵拉利品网

1, 石蜡包埋切片有几个步骤？

肠道的石蜡切片的制作
(1) 取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为 3~5mm*3~5mm*10~15mm。
(2) 固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10~20倍。
(3) 冲洗：固定12~24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。
(4) 脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h）
(5) 透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）(1h)→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ
(1h)
(6) 浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。
二甲苯与石蜡混合液（1:1）(1h)→石蜡Ⅰ（1h）→石蜡Ⅱ（1h）
浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片
的质量。
(7) 包埋：在小纸盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。
(8) 切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5~7μm的石蜡带。
(9) 粘片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。
(10) 烤片：将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干，待2~3小时后，即可取下编号。
(11) 苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。
①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯（I）10min→二甲苯（Ⅱ）10rain。
②复水：将脱蜡后的切片移入100%酒精5min→95%酒精5min→85%酒精5min→70%酒精5min→蒸馏水5min
③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞：将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中，10min，使细胞核着色；用自来水洗去切片上残余染液；用1%的盐酸酒精分色3秒；用自来水浸洗3h，显微镜下观察，直到胞核蓝化为止；然后切片入曙红溶液中染色5min，使细胞质着色。经95%酒精与100%酒精脱水，二甲苯透明后，中性树胶封片。
④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞：切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15~20min→蒸馏水速洗，镜检→95%和100%酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。
⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞：切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1%高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色（37℃恒温箱）30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95%酒精和100%酒精脱水→二甲苯透明，中性树胶封片。
切片经脱蜡下行入水：二甲苯（30 min）一二甲苯（10 min）一无水乙醇（5 min）一无水乙醇（5 min）一
95% 乙醇（5 min）一85%乙醇（5 min）一70% 乙醇（5 min）一流水冲洗（20 min）。人Ehrlich苏木精染
色12 min，蒸馏水速洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。入伊红染色2 min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95%酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法
阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法

2, 石蜡切片的制作方法？

石蜡切片操作步骤：
1、取材
2、固定
3、脱水：30%--50%---70%（每步60分钟）---85%---95%--100%---100%（每步30钟）。
4、透明：转入1/2二甲苯+1/2无水酒精混合液20ml透明1h，纯二甲苯20ml透明1h，再用纯二甲苯20ml透明40min，并回收各液。
5、浸蜡：
(1)将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中，每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行；
(2)将材料放入溶解的纯蜡中，时间为30分钟，该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。
6、包埋
(1)将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中，石蜡溶解后应过滤后使用，以免含杂质影响切片；
(2)材料放入纸船，并摆好在蜡中的位置，如果包埋的组织块较多，应进行编号；
(3)将纸船放置在冷水上加速冷却过程。
7、切片
(1)修整：用刀片修成方形或长方形蜡块；
(2)以少许热蜡液，将蜡块底部粘附于小木块上，以少许石蜡融化在蜡块边缘，加强粘附的强度；
(3)木块粘附于切片机上，调整切片机，使蜡块切面与切片刀刃平行；
(4)切成连续的蜡带，切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量，可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度，也可在冰箱中放置一段时间；
(5)分割蜡带，分开的蜡片放在45℃温水上，使蜡片展开。
8、粘片与烤片
(1)可用粘片剂防止蜡片滑脱，但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色，影响观察，实验表明，载玻片洗的足够干净，一般不会滑片；
(2)用载玻片捞取展开后的蜡片，调整蜡片的位置使位于载玻片中央，自然干燥。
9、脱蜡与醇化
(1)将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟，使石蜡完全溶解，共2次；
(2)溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中，每级10分钟；
(3)再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化，每级10分钟。
10、染色
(1)将切片放入番红染液中30分钟，番红染色后，将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；
(2)洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟；
11、脱水、透明与封片
(1)染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；
(2)洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明，每级10分钟，出现浑浊表示脱水不彻底，需重来；
(3)滴1-2滴中性树胶，将洁净的盖玻片倾斜放下，封片，镜检，选择好的贴上标签，性切片制作完成。
、

3, 如何制作石蜡切片？

[1]请教丁老师如何制作皮肤的石蜡切片
一皮肤组织标本制作及常用染色方法概述
皮肤组织标本常规以福尔马林固定，石蜡包埋，苏木素-伊红（Hematoxylin eosin HE）染色。皮肤组织的制片及染色技术与普通病理相同：标本固定-水洗-硬化、脱水-透明-包埋-切片-染色。但皮肤组织亦有其自身特点，如表皮细胞层次多，纤维及脂肪组织丰富，在取材及固定方面有其特殊性，制片及染色过程也应注意其特点，以提高制片质量。
二取材
a取材要足够大，应包括一小部分正常组织，以便与病理组织对照，因许多皮肤病的典型病变在真皮深层或皮下组织，故还应包括皮下组织，
b多数情况下应选择充分发展的损害，早期损害常为非特异性，晚期损害的病变大都处于恢复或变性、坏死阶段，充分发展的损害容易找到典型病变而明确诊断，还应尽量选择损害的活动边缘部分，中央部分可能病变已趋向于消退而找不出典型病变。对于水疱性、脓疱性以及含有病原体的损害应取早期损害，否则，若发生继发性改变（如变性、再生或继发性感染）可能隐蔽了重要病变的组织形态，同时，很难辨别病变形成的过程，
c尽量避免切除腋窝或腹股沟等部位皮肤组织，因该处皮肤由于磨擦，搔抓等常有萎缩，
d如疑有血管性或血液性疾患，最好不要取下肢标本，因下肢常有血液停滞或其它肢端血管病，皮内可能有含铁血黄素沉着，
e对某些肿瘤，如角化棘皮瘤，Spitz痣等，应尽可能将肿瘤全部切除，若不能全部切除，则最好自肿瘤中心至边缘取一楔形标本，以供组织学检查。
三固定
切下皮肤愈早固定愈好，夏天超过4小时，冬天超过24小时，标本体积就要收缩变形或发生自溶。常用固定液为10%中性福尔马林，其总体积应为组织块总体积的7~10倍，用10%福尔马林固定小块组织（1.5 cm*1.5 cm*0.2cm）数小时即可，时间稍长对制片影响不大，随着温度的增高可缩短固定时间，对固定时间过长的标本，可在制作切片时，用流水冲洗24小时，甚至48小时，以免影响染色效果。
四脱水、包埋、切片及染色
皮肤组织常用酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，切片厚度一般为5μm~7μm，与普通病理切片操作程序相同。HE染色法方便、经济，结果稳定，95%以上的组织切片都可以在HE染色下作出诊断，是皮肤组织病理最常用的方法。
[2]http://www.pathology-home.com/html/pathology/20051207_1.asp
自己点进去看吧，太多了复制不了

名词解释

酒精

乙醇（ethanol，结构简式CH3CH2OH或C2H5OH），有机化合物，俗称酒精，是最常见的一元醇。其在常温常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体，低毒，纯液体不可直接饮用，具有特殊香味（略带刺激），微甘（伴有刺激的辛辣滋味），易燃，其蒸气能与空气形成爆炸性混合物，能与水以任意比互溶，也能与氯仿、乙醚、甲醇、丙酮和其他多数有机溶剂混溶。其与甲醚是同分异构体。它的用途很广，可用于制造醋酸、饮料、香精、燃料等，医疗上常用体积分数为70%~75%的乙醇作消毒剂，但含酒精饮料中的乙醇也是致癌物。

二甲苯

二甲苯（dimethylbenzene）为无色透明液体；是苯环上两个氢被甲基取代的产物，存在邻、间、对三种异构体，在工业上，二甲苯即指上述异构体的混合物。 2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，二甲苯在3类致癌物清单中。