细胞培养过程中有哪些环节需要无菌操作?该如何操作? 微生物培养过程中哪些操作环节要进行无菌操作

知识中心

您的位置：朵拉利品网 > 知识中心 > 细胞培养过程中有哪些环节需要无菌操作?该如何操作? 微生物培养过程中哪些操作环节要进行无菌操作

2020-05-14 18:58:51 来源：朵拉利品网

1, 微生物培养过程中哪些操作环节要进行无菌操作

细胞培养注意事项
1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminar flow）以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台（至少Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心****，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）。5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000 小时/HEPA）。
6. 水槽可添加消毒剂（Zephrin 1:750），定期更换水槽的水

2, 植物组织培养是否需要无菌操作？应怎样做到无菌

要看你是用于细胞培养，还是微生物培养。
细胞培养的培养基如果是买的液态的培养基可以直接用，基本是无菌的。如果是粉末的自己配好以后成为溶液后，在无菌操作台用过滤器过滤，装培养基的瓶子要高压灭菌。
微生物培养的话，皿（根据是玻璃的还是塑料的考虑是干热还是高压灭菌。）。培养基配好放入锥形瓶，瓶口用棉花轻微塞住，不能塞死了（防止液体沸腾冲出），然后用报纸包住瓶口，绳子系好，高压灭菌。然后无菌操作分装铺满。
具体你还可以参考丁香园和小木虫。

名词解释

培养基

培养基是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。

灭菌

灭菌是指采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。灭菌可根据不同的需求，采用不同的方法，如培养基灭菌一般采用湿热灭菌，空气则采用过滤除菌。

无菌

指没有活菌的意思，又是生物技术中的一个重要概念。只有在培养基、发酵设备等处于无菌的前提下，微生物接种后，才能实现纯种培养，最终得到所需的产品。防止微生物进入机体或物体的方法，称为无菌操作或无菌技术。进行微生物学实验、外科手术、换药、注射时，均需严格遵守无菌操作规定。