常见蛋白质等电点不同蛋白质的等电点不同吗？？？

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2020-05-13 11:20:24 来源：朵拉利品网

1, 不同蛋白质的等电点不同吗？？？

不同的
常见蛋白质等电点参考值
蛋白质等电点
鲑精蛋白[salmine] 12.1
鲱精蛋白[clupeine] 12.1
鲟精蛋白[sturline] 11.71
胸腺组蛋白[thymohistone] 10.8
珠蛋白（人）[globin(human)] 7.5
卵白蛋白[ovalbuin] 4.71;4.59
伴清蛋白[conal bumin] 6.8,7.1
血清白蛋白[serum albumin] 4.7-4.9
肌清蛋白[myoal bumin] 3.5
肌浆蛋白[myogen A] 6.3
β-乳球蛋白[β-lactoglobulin] 5.1-5.3
卵黄蛋白[livetin] 4.8-5.0
γ1—球蛋白（人）[γ1-globulin(human)] 5.8,6.6,7.3,8.2
γ2—球蛋白（人）[γ2-globulin(human)] 5.2-5.5
肌球蛋白A[myosin A] 5.1
原肌球蛋白[myosin A] 5.9
铁传递蛋白[siderophilin] 3.4-3.5
胎球蛋白[fetuin] 5.5-5.8
血纤蛋白原[fibrinogen] 4.8
α-眼晶体蛋白[α-crystallin] 6.0
β-眼晶体蛋白[β-crystallin] 5.1
花生球蛋白[arachin] 3.9
伴花生球蛋白[conarrachin] 3.7-5.0
角蛋白类[keratins] 4.6-4.7
还原角蛋白[keratein] 6.5-6.8
胶原蛋白[collagen] 4.8-5.2
鱼胶[ichthyocol] 4.7-5.0
白明胶[gelatin] 4.0-4.1
α-酷蛋白[α-casein] 4.5
β-酷蛋白[β-casein] 5.8-6.0
γ-酷蛋白[γ-casein] 3.83-4.41
α-卵清粘蛋白[α-ovomucoid] 1.8-2.7
α1-粘蛋白[α1-mucoprotein] 5.5
卵黄类粘蛋白[vitellomucoid] 3.2-3.3
尿促性腺激素[urinary gonadotropin] 11.0-11.2
溶菌酶[lyso zyme] 6.99
肌红蛋白[myoglobin] 7.07
血红蛋白（人）[hemoglobin(human)] 7.23
血红蛋白（鸡）[hemoglobin(hen)] 6.92
血红蛋白（马）[hemoglobin(horse)] 4.6-6.4
血蓝蛋白[hemerythrin] 5.6
蚯蚓血红蛋白[chlorocruorin] 4.3-4.5
血绿蛋白[chlorocruorin] 4.6-6.2
无脊椎血红蛋白[erythrocruorins] 9.8-10.1
细胞色素C[cytochrome C] 4.47-4.57
视紫质[rhodopsin] 5.2
促凝血酶原激酶[thromboplastin] 5.5
α1-脂蛋白[α1-lipoprotein] 5.4
β1-脂蛋白[β1-lipoprotein] 5.9
β-卵黄脂磷蛋白[β-lipovitellin] 3.75
芜菁黄花病毒[turnip yellow vvirus] 5.3
牛痘病毒[vaccinia virus] 6.85
生长激素[somatotropin] 5.73
催乳激素[prolactin] 5.35
胰岛素[insulin] 1.0
胃蛋白酶[pepsin] 8.1
糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶[chymotrypsin] 4.9
牛血清白蛋白[bovine serum albumin] 7.8
核糖核酸酶（牛胰）[ribonuclease或Rnase(bovine pancreas)]4.58
甲状腺球蛋白[thyroglobulin] 4

2, 蛋白质等电点的测定方法

●方法：平板等电聚焦
●原理：蛋白质分子在含有载体两性电介质形成的连续而稳定的线性pH梯度中进行电泳。但不自是按照等电点不同被分离。
●仪器：Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell
●样品要求：
●液体：浓度>3mg/ml；体积>200ul；固体：质量>200ug
●样品纯度>90%；含盐量<3 0mM；分子量：一般要求大于1000Da
●常见影响测试情况：
1、蛋白质纯度不足
2、含盐量过高
3、蛋白质分子量太小，导致无法固定染色

一、目的：
了解等电点的意义及其与蛋白质分子聚沉能力的关系。
二、原理：
蛋白质的分子量很大，它能形成稳定均一的溶液，主要是由于蛋白质分子都带有相同符号的电荷，同时蛋白质分子周围有一层溶剂化的水膜，避免蛋白质分子之间聚集而沉降。
蛋白质分子所带的电荷与溶液的pH值有很大关系，蛋白质是两性电解质，蛋白质在碱性溶液中成阴离子，在酸性溶液中成阳离子：
蛋白质分子所带净电荷为零时的pH值称为蛋白质的等电点（PI）。在等电点时，蛋白质分子在电场中不向任何一极移动，而且分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加，所以这时可以使蛋白质溶液的粘度、渗透压均减到最低，且溶液变混浊。若再加入一定量的溶剂如乙醇、丙酮，它们与蛋白质分子争夺水分子，竭力减低蛋白质水化层的厚度而使混浊更加明显。
各种蛋白质的等电点都不相同，但偏酸性的较多，如牛乳中的酪蛋白的等电点是4.7~4.8，血红蛋白等电点为6.7~6.8，胰岛素是5.3~5.4，鱼精蛋白是一个典型的碱性蛋白，其等电点在pH12.0~12.4。近年来蛋白质的等电点可以采用等电聚焦技术加以准确测定，但需一定的实验条件。本实验采用蛋白质在不同pH溶液中形成的混浊度来确定，即混浊度最大时的pH值即为该种蛋白质的等电点值，这个方法虽然不很准确，但在一般实验条件下都能进行，操作也简便。
四、操作步骤：
1.制备蛋白质胶液
(1)称取酪蛋白3克，放在烧杯中，加入40℃的蒸馏水。
(2)加入50毫升1 mol·L-1氢氧化钠溶液，微热搅拌直到蛋白质完全溶解为止。将溶解好的蛋白溶液转移到500毫升容量瓶中，并用少量蒸馏水洗净烧杯，一并倒入容量瓶。
(3)在容量瓶中再加入1 mol·L-1醋酸溶液50毫升，摇匀。
(4)加入蒸馏水定容至500毫升，得到略现浑浊的，在0.1mol·L-1 NaAC溶液中的酪蛋白胶体。
2.等电点测定
按下表顺序在各管中加入蛋白质胶液，并准确地加入蒸馏水和各种浓度的醋酸溶液，加入后立即摇匀。
观察各管产生的混浊并根据混浊度来判断酪蛋白的等电点。观察时可用+，++，+++，表示浑浊度。

名词解释

蛋白质

蛋白质（protein）是大型生物分子，或高分子，它由一个或多个由α-氨基酸残基组成的长链条组成。蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说，蛋白质约占人体全部质量的18%，最重要的还是其与生命现象有关。蛋白质（protein）是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

等电点

等电点是两性电解质所带电荷因溶液的pH值不同而改变，当两性电解质正负电荷数值相等时，溶液的pH 值即称为该物质的等电点。蛋白质是两性电解质，其等电点和它所含的酸性氨基酸和碱性氨基酸的数量比例有关。各种蛋白质因氨基酸残基组成不同，等电点也不一样。当溶液在某一特定pH值的条件下，蛋白质所带正电荷与负电荷恰好相等（总净电荷为零）时，在电场中既不向阳极移动，也不向阴极移动。因此利用电泳的方法可以确定蛋白质的等电点，也可以将不同带电性质和不同大小、形状的蛋白质分子进行分离纯化。蛋白质在等电点时，因为没有相同电荷而互相排斥的影响，所以最不稳定，溶解度最小，极易借静电引力迅速结合成较大的聚集体，因而沉淀析出。同时蛋白质的黏度、渗透压、膨胀性以及导电能力均为最小。（张林）

溶液

溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物，被分散的物质（溶质）以分子或更小的质点分散于另一物质（溶剂）中。物质在常温时有固体、液体和气体三种状态。因此溶液也有三种状态，大气本身就是一种气体溶液，固体溶液混合物常称固溶体，如合金。一般溶液只是专指液体溶液。液体溶液包括两种，即能够导电的电解质溶液和不能导电的非电解质溶液。所谓胶体溶液，更确切的说应称为溶胶。其中，溶质相当于分散质，溶剂相当于分散剂。在生活中常见的溶液有蔗糖溶液、碘酒、澄清石灰水、稀盐酸、盐水、空气等。