福林酚试剂法福林酚试剂法测定蛋白质含量的方法？

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2020-04-28 06:23:30 来源：朵拉利品网

1, 福林酚试剂法测定蛋白质含量的方法？

原理：蛋白质与福林酚试剂反应，生成深蓝色复合物。蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照，而确定蛋白质含量。
操作方法：1、标准曲线的制作：分别吸取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml标准溶液于小试管中，分别加进不同量的蒸馏水，补足到1ml。各加入5ml试剂甲，混匀后于室温下（25℃左右）放置10min。再加入0.5ml试剂乙，立即混匀，于室温下反应30min。于500nm波长下测定光密度。以吸光值作为纵坐标，蛋白质含量为横坐标绘制标准曲线。
2、样品蛋白质含量的测定
取1ml样品溶液，加入5ml试剂甲，混匀，于25℃左右放置10min。再加入0.5ml试剂乙，立即摇匀，于25℃左右反应30min，测定吸光值，从标准曲线查出样品蛋白质含量。
生物帮上面有的，免疫组化染色试剂盒

2, 福林

看看在不在药典三部，生物制品那一册里，我记的不是很清楚了。
药检所里应该有这个依据。
看看血舒通注射液的标准里好像有这项。
试剂碱性铜溶液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合，作为乙液。
临用前，甲液与乙液合并，并加水至500ml。
操作法（1）对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。
(2) 供试品溶液的制备照各药品项下的方法制备。
(3) 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜溶液1.0ml，摇匀，各加入福林酚溶液（福林试液中的贮备液1→16）4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水中10分钟，在650nm的波长处测定吸收度；同时以0管作为空白。以测得的吸收度与对应的浓度计算回归方程。
(4) 测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜溶液”起，依法测定，从回归方程求得供试品溶液的浓度，并乘以稀释倍数，即为多肽含量。
?
或者是：胸腺肽溶液国家药品标准附录二——福林酚测定法[10]

3, 福林酚法的测定方法出自哪个标准？

可以
以测定水果为例
1 材料和方法
1.1 试剂
1.1.1 药品钨酸钠（Na2WO4·2H2O）、钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）、硫酸锂（Li[2]sO4）、磷酸（H3PO4 85%）、磷钼酸（24MoO3-P2O5·xH2O）、碳酸钠（Na2CO3）、盐酸和溴水为分析纯。一水合没食子酸标样为Sigma-Aldrich公司产品。水为蒸馏水。
1.1.2 FC显色剂称取50.0 g钨酸钠和12.5 g钼酸钠，用350 mL蒸馏水溶于1 000 mL回流瓶中，加入25mL磷酸和50mL盐酸，混匀，微沸回流2 h.加入75.0 g硫酸锂、25mL蒸馏水和数滴溴水，开口沸腾约15min（至溴水挥尽为止），冷却，定容至500mL，过滤。置棕色瓶中保存备用。使用时加入1倍蒸馏水稀释。1.1.3 FD显色剂称取100.0 g钨酸钠和20.0 g磷钼酸，溶于200mL蒸馏水，加入5mL磷酸。加热回流2 h，冷却，定容至lL。
1.1.4 7,5%碳酸钠溶液称取37.5 g碳酸钠，溶于250mL温水，混匀，冷却，定容至500mL。
1.1.5 一水合没食子酸标准溶液称取0.110 g-水合没食子酸，用蒸馏水溶解、定容至100 mL，此溶液质量浓度为1 000 mg/L。分别吸取此溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL至100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，所得一水合没食子酸标准溶液的质量浓度分别为0.0、10、20、30、40、50 mg/L。
1.2 仪器
紫外分光光度计。
1.3 方法
1.3.1样品预处理将水果洗净、晾干。取可食部分切碎，组织捣碎机匀浆，备用。
1.3.2 总多酚的提取取试样适量（葡萄酒吸取2mL，葡萄和柿子称取2 g匀浆，其他水果称取5 g匀浆），用80mL蒸馏水洗人100mL容量瓶中，至100℃沸水浴中保温30min，取出，冷却，定容，过滤，滤液备用。
1.3.3测定使用5mL刻度吸管吸取1.0mL滤液（若多酚含量过高，可适当稀释）或一水合没食子酸标准溶液，分别用刻度吸管加入FC显色剂或FD显色剂及7.5%碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至10 mL，混匀，室温显色（下同），测定765 nm吸光度，根据稀释倍数和从标准曲线中查出的浓度，计算样品多酚含量。

名词解释

试剂

试剂（reagent），又称生物化学试剂或试药。主要是实现化学反应、分析化验、研究试验、教学实验、化学配方使用的纯净化学品。一般按用途分为通用试剂、高纯试剂、分析试剂、仪器分析试剂、临床诊断试剂、生化试剂、无机离子显色剂试剂等。

蛋白质

蛋白质（protein）是大型生物分子，或高分子，它由一个或多个由α-氨基酸残基组成的长链条组成。蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说，蛋白质约占人体全部质量的18%，最重要的还是其与生命现象有关。蛋白质（protein）是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

ml

ML，monolayer的缩写，是覆盖度的单位。