寡核苷酸探针的最大的优势是寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？

知识中心

您的位置：朵拉利品网 > 知识中心 > 寡核苷酸探针的最大的优势是寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？

2019-06-28 18:06:31 来源：朵拉利品网

1, 寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？

watson,crike的DNA双螺旋模型。
如果是填空什么的这就够了。如果是论述大题的话（这个题目还不算大），我这里就不具体论述了简单的介绍一下论述思路吧。
（毕业多年，好久没学习了，具体的也说不太清楚了。唯记得上学的时候论述DNA双螺旋模型是整个分子生物学的基础一题，貌似还基本拿了满分）
首先：什么事寡核苷酸探针杂交，分子过程。这样就可以为论述其分子基础提供背景和素材；
其次：将DNA双螺旋模型是什么，有什么内容，太精确的不记得了，大致记得是可分为3点，1. 核酸单链，2. 两条链（不是3条或几条链聚合，双螺旋模型之前确实有人提出了DNA存在形式的3链结合模式），同时碱基互补配对；3. 扭转折叠成双螺旋结构；
最后：将DNA双螺旋模型和寡核苷酸探针杂交相结合，杂交过程都是以双链互补结合为基础的；

2, 基因探针的探针标记

荧光共振能量传递（FRET）
某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。
2.荧光化学：
荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5"-3"外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
二.实时荧光PCR技术靶基因的确定及引物和探针的设计原则
1.靶基因的确定：选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性（漏检）。
2.检测片段的确定：选择检测组内的保守（突变少）（避免假阴性）、组间特异的序列（突变多）（避免假阳性）作为引物探针的设计位置。片段长度70-150bp。
3.引物：长度17-25bp;GC含量30-80%；退火温度（Tm值）58-60℃；避免稳定的引物二聚体（特别是多联检测）及发夹结构（自由能大于-3.5kc/m）；序列不能出现连续的G,3"端避免G或C，最后5个碱基内避免两个以上的G或C。
4.探针：长度20-30bp(Taqman)或16-25bp(MGB);GC含量30-80%;Tm值为68-70℃；避免稳定的二聚体及发夹结构（自由能大于-3.5kc/m）;5"端不能是G；位置尽量靠近上游引物；选择波长差异较大（多联检测）或Fam（单联检测）的荧光标记。
三.特点和优势
1.特异性强：引物和探针的“双保险”，避免检测的假阳性。
2.灵敏度高：分析PCR产物的对数期，自动化仪器收集荧光信号，避免了许多人为因素干扰。
3.避免污染：全封闭反应，无须PCR后处理。
4.实现定量：运用标准品获得标准曲线，结合Ct值进行准确定量。
5.高效低耗：可实现一管多检。
6.操作简便：在线式实时监测扩增结果，不必接触有害物质。
7.快速：反应时间
四.实用意义：
1.提高检测效率，缩短检测周期，提高通关速度；
2.降低检测成本，提高经济与社会效益。

1, 寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？

2, 基因探针的探针标记

相关概念

探针