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知识中心核酸的分离纯化 在核酸的分离提取和纯化过程中,都利用核酸的哪些生物学特性？
2019-06-28 18:06:28
来源：朵拉利品网
1, 在核酸的分离提取和纯化过程中,都利用核酸的哪些生物学特性？
核酸（nucleic acid）是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。无论是进行核酸结构还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。核酸样品质量将直接关系到实验的成败。核酸分离、纯化原则：1.保持核酸分子一级结构的完整性。因为遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸的—级结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式。2.分离核酸原则：1）温度不要过高；2）控制pH值范围（pH值5-9）; 3）保持一定离子强度； 4）减少物理因素对核酸的机械剪切力.在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解，细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构。所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。常用的DNA酶抑制剂有1.金属离子螯合剂：如EDTA-Na2（乙二胺四乙酸二钠）、8-羟基喹啉。2.阴离于型表面活性剂如SDS，该试剂除对核酸酶有抑制作用外，还能使蛋白质变性，并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物，该复合物在高盐溶液中沉淀。常用的RNA酶（RNAase）抑制剂有：1.皂土（bentonite ）作用机制：皂土带负电荷，能吸附RNase，使其失活。2. DEPC（二乙基焦碳酸盐） （C2H5OCOOCOOC2H5）粘性液体，很强的核酸酶抑制剂。作用机制：与蛋白质中His结合使蛋白变性。以上答案希望对你有帮助。
2, 核酸在分离与纯化 时,需要用那些物质？其作用是什么？
1 加入浓盐溶液（如NaCl）核酸-蛋白质加入NaCl后，破坏静电吸力，使氢键破坏，核蛋白解聚；2 加入SDSSDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外，还具有使核酸从蛋白质上游离出来的功能；3 酚/氯仿抽提酚/氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并对核酸酶有抑制作用。氯仿比重大，能加速有机相与水相分层，减少残留在水相中的酚，同时氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。在酚/氯仿抽提核酸提取液时，需要振摇，为防止起泡和促使水相与有机相的分离，再加上一定量的异戊醇（酚：氯：异戊醉=25:24:1）。
3, 为防止蛋白质变性,在分离纯化蛋白质的操作中应该注意什么
为防止蛋白质变性，在分离纯化蛋白质的操作中应该注意的几项一般有：1，低温温度是造成蛋白质变性的主要原因之一，在较高的温度下，绝大多数蛋白质较难保证结构的稳定。一般采取的操作是冰浴或者在层析冷柜中进行实验。2，合适的pHpH的剧烈变化，或者极高极低的环境pH值容易总成蛋白质变性。在分离纯化时，因为不同层析柱的需求，可能会需要调节pH。使用较低浓度的盐酸或者氢氧化钠调节pH有助于保持蛋白的稳定性。3，合适的盐浓度不同蛋白质的亲疏水性不同，在不同的盐浓度下有各自的稳定窗口，这个很难预测，一般只能通过预实验确定蛋白的稳定盐浓度才能避免在分离纯化时大量变性。4，避免剧烈的搅拌或者晃动因为剪切力对蛋白质的结构可能会造成破坏，所以在混匀蛋白溶液时需要尽可能的动作轻柔。而将蛋白溶液加入其它溶液时也需要贴壁倾倒，不要剧烈操作造成蛋白溶液起泡变性。
4, 以DNA的分离纯化为例,阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注...
首先最重要的一点事保证大分子物质不变性，否则分离纯化的工作将毫无意义，对于分离dna如果，是从生物体中直接提纯，要注意提取溶液的浓度，根据你所想要的A型或者B型来选配盐水，ph当然很重要，稍微偏碱性有利于提纯。如果从rna和dna的混合物种分离，直接使用弱碱性的缓冲液进行电泳就行。此外，就是要提取周期短。周期越长提取效果越差步骤尽量简洁。过于繁琐的步骤会让生物大分子活性降低，尤其提取酶的时候尤其重要当然一定的纯度也是必须的考虑因素，根据实验需要，提纯也需要不同的纯度，自然方法有差异提纯过程中的副产物也是需要考虑的因素。要保证他们不能影响提纯工作的进行
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核酸
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸（简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA）。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用——其中转运核糖核酸，简称tRNA，起着携带和转移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，简称mRNA，是合成蛋白质的模板；核糖体的核糖核酸，简称rRNA，是细胞合成蛋白质的主要场所。
核酸酶
核酸酶属EC 3.1.-酶类。催化核酸酯键的水解。具有糖特异性的核酸酶，指核糖核酸酶或脱氧核糖核酸酶；其中核酸内切酶在核酸内部切断核酸链，而5′-和3′-外切核酸酶则从5′端和3′端切除核苷酸残基。某些核酸酶具有双链或单链核酸的底物特异性。
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