寡核苷酸引物诱变技术寡核苷酸引物的作用是什么？在PCR实验中的作用

知识中心

您的位置：朵拉利品网 > 知识中心 > 寡核苷酸引物诱变技术寡核苷酸引物的作用是什么？在PCR实验中的作用

2019-06-28 18:05:36 来源：朵拉利品网

1, 寡核苷酸引物的作用是什么？在PCR实验中的作用

PCR技术中的引物的本质和作用。
引物是一小段单链DNA或RNA，引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行复制。
引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。
启动子和引物两者的区别：
启动子是DNA分子上能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域，在许多情况下，还包括促进这一过程的调节蛋白的结合位点，决定RNA聚合酶转录起始位点的DNA序列。引物是一小段单链DNA或RNA，引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行复制。引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。
启动子是位于结构基因前的非编码区对转录起调控作用的一段DNA序列。引物则是游离于DNA复制的模板链之外的对DNA复制起调控作用的一小段单链DNA或RNA。

2, 定点诱变技术经历了几个阶段？目前最理想的定点诱变方法是什么？...

定点诱变：可将病毒的随机突变纳入人们的规划之中，这一技术可将DNA基因组或RNA基因组的cDNA任何既定部位的核苷酸替换，或者使之缺失，或者插入另一段核苷酸。[1]
编辑本段方法
为达到这一目的，一般用分子杂交技术，即将含有特定位点变异的寡核苷酸通过分子杂交，导入载体DNA，再转化到载体中扩增杂交DNA，最后根据设计的分子标记，在一定条件下筛选突变株。由于PCR及核苷酸测序技术的日益普及，定点诱变在病毒学的应用更为方便，它可用于确定病毒基因的致病作用，也可用于研制具有免疫学标记的弱毒病毒疫苗等，受到普遍重视。许多病毒还可作为定点诱变所需的载体，根据不同目的可选用痘病毒、腺病毒、疱疹病毒、乳头瘤病毒、披膜病毒等。
在事先不了解特定核苷酸序列功能的情况下，通过定点诱变产物的分析，推测该序列编码的蛋白质性质及功能，这种利用基因序列资料反过来研究动物体内的遗传学效应的手段，称之为反求遗传学，广泛应用于病毒的遗传变异研究。

相关概念

定点诱变

定点诱变（Site-directed mutagenesis），是在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中任何一个特定碱基的技术，包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等。

病毒

计算机病毒（Computer Virus）是编制者在计算机程序中插入的破坏计算机功能或者数据的代码，能影响计算机使用，能自我复制的一组计算机指令或者程序代码。计算机病毒具有传播性、隐蔽性、感染性、潜伏性、可激发性、表现性或破坏性。计算机病毒的生命周期：开发期→传染期→潜伏期→发作期→发现期→消化期→消亡期。计算机病毒是一个程序，一段可执行码。就像生物病毒一样，具有自我繁殖、互相传染以及激活再生等生物病毒特征。计算机病毒有独特的复制能力，它们能够快速蔓延，又常常难以根除。它们能把自身附着在各种类型的文件上，当文件被复制或从一个用户传送到另一个用户时，它们就随同文件一起蔓延开来。