寡核苷酸探针设计原则如何设计特异性荧光原位杂交探针

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2019-06-28 18:05:07 来源：朵拉利品网

1, 如何设计特异性荧光原位杂交探针

1.探针分为好多种，你要先决定你用何种，是RNA探针还是DNA探针，杂交时，RNA-RNA结合的稳定性要比DNA-RNA好，所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点；DNA探针背景稍微深一些，不过也可以，标记方法比前者简单一些，另外还有寡核苷酸探针，此类探针分子量小，通透性好，但就是标记的敏感性不高。
2.原位杂交相比免疫组化，定位相对准确，但如果蛋白在间质中发挥作用，原位杂交就检测不出来了，结合图像分析，原位杂交也可以对目的基因的转录半定量。
3.首先是标本对照，这个包括阳性对照和阴性对照；第二个是探针对照，主要是明确探针的特异性；第三个是探针正义连阴性对照，第四个未标记探针竞争抑制；第五个不含探针的阴性对照；第六个质粒对照，第七个无关探针对照。
4.若要定量，该试验不可行，还是作Northern，若要显示形态、定位，最好结合免疫组化。

2, 寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？

watson,crike的DNA双螺旋模型。
如果是填空什么的这就够了。如果是论述大题的话（这个题目还不算大），我这里就不具体论述了简单的介绍一下论述思路吧。
（毕业多年，好久没学习了，具体的也说不太清楚了。唯记得上学的时候论述DNA双螺旋模型是整个分子生物学的基础一题，貌似还基本拿了满分）
首先：什么事寡核苷酸探针杂交，分子过程。这样就可以为论述其分子基础提供背景和素材；
其次：将DNA双螺旋模型是什么，有什么内容，太精确的不记得了，大致记得是可分为3点，1. 核酸单链，2. 两条链（不是3条或几条链聚合，双螺旋模型之前确实有人提出了DNA存在形式的3链结合模式），同时碱基互补配对；3. 扭转折叠成双螺旋结构；
最后：将DNA双螺旋模型和寡核苷酸探针杂交相结合，杂交过程都是以双链互补结合为基础的；

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