单链寡核苷酸一条单链DNA和一条双链RNA分子量相同,试述可以用几种方法区分？...

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2019-06-28 18:05:03 来源：朵拉利品网

1, 一条单链DNA和一条双链RNA分子量相同,试述可以用几种方法区分？...

重要：1。DNA溶于苯酚而RNA不溶，故可用苯酚来沉淀
这是最简单的方法。
2。利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。
下面是生物化学的总结知识
1.两性解离：DNA无，只有酸解离（○P），碱基被屏蔽（在分子内部形成了H键）。
RNA有，有PI。
2.粘度大：DNA>RNA，粘度由分子长度/直径决定，DNA为线状分子，RNA为线团。
3.碱的作用：DNA耐碱
RNA易被碱水解。
4.显色反应：鉴别DNA和RNA
浓HCl 浓HCl
RNA ------→ 绿色化合物 DNA ------→ 蓝紫色化合物
苔黑酚二苯胺
啡啶溴红（荧光染料）和溴嘧啶都可对DNA染色，原理是卡在分子中，DNA的离心
和电泳显色可用它们。
5.溶解性：都溶于水而不溶于乙醇，因此，常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶，故可用苯酚来沉淀RNA。
6.紫外吸收：核酸的λm=260nm，碱基展开程度越大，紫外吸收就越厉害。
当A=1时，DNA:50ug/ml,RNA和单链DNA:40ug/ml，寡核苷酸：20ug/ml。
用A260/A280还可来表示核酸的纯度：>1.8,DNA很纯；>2RNA很纯。
7.沉降速度：对于拓扑异构体（核苷酸数目相同的核酸），其沉降速度为：
RNA >超螺旋DNA >解链环状DNA >松弛环状DNA >线形DNA
也就是在离心管中最上层是线形DNA，最下面是RNA。
8.电泳：核苷酸、核酸均可以进行电泳，泳动速度主要由分子大小来决定，因此，电泳是测定核酸分子量的好方法。
9.DNA分子量测定最直接的方法：用适当浓度的EB（溴嘧啶）染色DNA，可以将其他形式的DNA变成线形DNA，用电镜测出其长度，按B-DNA模型算出bp数，根据核苷酸的平均分子量就可计算出DNA的分子量

2, 相同浓度下双链DNA、单链DNA、寡聚核苷酸OD值比较,尤其是单链...

不用管单链DNA的OD值，我们提取DNA后进行吸光度测定的目的是想看DNA的纯度，通常会遇到RNA污染和双链DNA污染两种情况：
1）以H2O作为空白，吸光度（260nm）值后确定稀释倍数，使A260值在2.0左右（DNA此时的浓度约为100μg/mL。（由于二苯胺法的测定范围是40—400斗g/mL DNA，所以DNA浓度如果太小会影响测定结果）。
2）测定A280。
3）计算A260/A280。
纯的DNA为1.8,RNA为2.0。如果样品中混有RNA，则比值大于1.8；如果样品中混有蛋白质，则比值小于1.8。

3, 判断基因组为单链还是双链用哪个酶切

判断基因组为单链还是双链用哪个酶切
酶切消化获得目的基因”中的“酶切消化”是什么
采用常规PCR方法扩增目的基因
PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应.DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链.在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链.

相关概念

DNA

脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid，缩写为DNA）又称去氧核糖核酸，是一种最重要的生命基础分子，可组成遗传指令，以引导生物遗传、生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的信息储存，可比喻为“蓝图”或“食谱”。其中包含的信息，是建构细胞内其他化合物的最终源头。带有遗传信息的DNA片段称为基因，其他的DNA序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传信息的表达。DNA是一种长链聚合物，其基本组成单位称为核苷酸，其中的脱氧核糖与磷酸借由酯键相连，组成DNA长链的骨架。每个糖单位都会与某一种碱基相连，组成生物界DNA的碱基主要有四种，分别称为A、T、C、G，这些碱基沿着DNA长链排列，形成的序列，即是遗传信息，用以指导RNA的合成，进而指导蛋白质的合成。

RNA

核糖核酸（缩写为RNA，即Ribonucleic Acid），核糖核酸存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。 RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T。 2018年5月，湖南大学生物学院病原生物学与免疫学研究所团队新发现了一种免疫抵抗RNA病毒的工作机制。

核酸

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸（简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA）。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用——其中转运核糖核酸，简称tRNA，起着携带和转移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，简称mRNA，是合成蛋白质的模板；核糖体的核糖核酸，简称rRNA，是细胞合成蛋白质的主要场所。