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知识中心寡核苷酸探针意义 寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？
2019-06-28 18:04:12
来源：朵拉利品网
1, 寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？
watson,crike的DNA双螺旋模型。如果是填空什么的这就够了。如果是论述大题的话（这个题目还不算大），我这里就不具体论述了简单的介绍一下论述思路吧。（毕业多年，好久没学习了，具体的也说不太清楚了。唯记得上学的时候论述DNA双螺旋模型是整个分子生物学的基础一题，貌似还基本拿了满分）首先：什么事寡核苷酸探针杂交，分子过程。这样就可以为论述其分子基础提供背景和素材；其次：将DNA双螺旋模型是什么，有什么内容，太精确的不记得了，大致记得是可分为3点，1. 核酸单链，2. 两条链（不是3条或几条链聚合，双螺旋模型之前确实有人提出了DNA存在形式的3链结合模式），同时碱基互补配对；3. 扭转折叠成双螺旋结构；最后：将DNA双螺旋模型和寡核苷酸探针杂交相结合，杂交过程都是以双链互补结合为基础的；
3, 高中生物DNA探针含义是什么？运行原理？
DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。以细菌为例，目前分子杂交技术用于细菌的分类和菌种鉴定比之G+C百分比值要准确的多，是细菌分类学的一个发展方向。加之分子杂交技术的高敏感性，分子杂交在临床微生物诊断上具有广阔的前景。细菌的基因组大小约5*106bp，约含3000个基因。各种细菌之间绝大部分DNA是相同的，要获得某细菌特异的核酸探针，通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法，即将细菌DNA切成小片段后分别克隆得到包含基因组的全信息的克隆库。然后用多种其它菌种的DNA作探针来筛选，产生杂交信号的克隆被剔除，最后剩下的不与任何其它细菌杂交的克隆则可能含有该细菌特异性DNA片段。将此重组质粒标记后作探针进一步鉴定，亦可经DNA序列分析鉴定其基因来源和功能。因此要得到一种特异性DNA探针，常常是比较繁琐的。探针DNA克隆的筛选也可采用血清学方法，所不同的是所建DNA文库为可表达性，克隆菌落或噬斑经裂解后释放出表达抗原，然后用来源细菌的多克隆抗血清筛选阳性克隆，所得到多个阳性克隆再经其它细菌的抗血清筛选，最后只与本细菌抗血清反应的表达克隆即含有此细菌的特异性基因片段，它所编码的蛋白是该菌种所特有的。用这种表达文库筛选得到的显然只是特定基因探针。对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。这也是许多重要蛋白质的编码基因的克隆方法。该方法的第一步是分离纯化蛋白质，然后测定该蛋白的氨基或羟基末端的部分氨基酸序列，然后根据这一序列合成一套寡核苷酸探针。用此探针在DNA文库中筛选，阳性克隆即是目标蛋白的编码基因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织有所不同。真核基因中含有非编码的内含子序列，而原核则没有。因此，真核基因组DNA探针用于检测基因表达时杂交效率要明显低于cDNA探针。 DNA探针（包括cDNA探针）的主要优点有下面三点：①这类探针多克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽，制备方法简便。②DNA探针不易降解（相对RNA而言），一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移，随机引物法，PCR标记法等，能用于同位素和非同位素标记. DNA探针可以用来诊断寄生虫病，现场调查及虫种鉴定，可用于病毒性肝炎的诊断，遗传性疾病的诊断，可用于改造变异的基因，可用于检测饮用水病毒含量。具体方法：用一个特定的DNA片段制成探针，与被测的病毒DNA杂交，从而把病毒检测出来。与传统方法相比具有快速、灵敏的特点。传统的检测一次，需几天或几个星期的时间，精确度不高，而用DNA探针只需一天。据报道，能从1t水中检测出 10个病毒来，精确度大大提高。 DNA探针是一个单链的RNA，通过这条特定的RNA，让RNA上的碱基和目标DNA的碱基配对（目标DNA已经解旋，并分成两条链），
相关概念
杂交
杂交（hybridization；cross；crossing），指两条单链DNA或RNA的碱基配对，是遗传学中经典的也是常用的实验方法。通过不同的基因型的个体之间的交配而取得某些双亲基因重新组合的个体的方法。一般情况下，把通过生殖细胞相互融合而达到这一目的过程称为杂交；而把由体细胞相互融合达到这一结果的过程称为体细胞杂交。杂交产生的后代称为杂种，不同种属之间，或是地理上远缘的种内亚种之间个体的交配称为远缘杂交，所得个体称为远缘杂种。
固相
固体是物质存在的一种状态，是四种基本物质状态之一。与液体和气体相比固体有比较固定的体积和形状、质地比较坚硬。固体是由数量级为10^23的粒子所结合成的宏观体系，是一个复杂的多体系统。固体可能是晶体，其空间排列是有规则的晶格排列（例如金属及冰），也可能是无定形体，在空间上是不规则的排列（例如玻璃）。一般而言，固体是宏观物体，一个物体要达到一定的大小才能够被称为固体，但是对其大小无明确的规定。固体的物理性质包括气味、颜色、体积、密度、熔点、沸点、比热、室温下的形态（固体、液体或气体）、硬度、多孔性、折射率等。
探针
探针是一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500bp），用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷-32）、萤光染料或者酶（如辣根过氧化物酶）标记成为探针。磷-32通常被掺入组成DNA的四种核苷酸之一的磷酸基团中，而荧光染料和酶与核酸序列以共价键相连。
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