Oligo Oligo Primer和Random Primers的区别

2019-06-28 18:02:52 来源：朵拉利品网

1, Oligo Primer和Random Primers的区别

1、Oligo(dT ) Primer也可称为寡聚胸腺嘧啶引物，是只有胸腺嘧啶组成的寡居核苷酸链，长度范围在10~20个碱基之间，常用的Oligo(dT )Primer有15碱基、16碱基和18碱基。
Oligo(dT ) Primer利用了碱基互补配对的原则以及mRNA含有poly(A)尾巴的特点，巧妙设计而成。由于这个特点，使得Oligo(dT ) Primer只能和mRNA配对，并在适宜的条件下完成反转录。原核生物的RNA，真核生物的rRNA和tRNA无poly(A)尾巴，因此用Oligo(dT ) Primer作为反转录引物时，这些RNA均不能作为模板。这限制了反转录后获得的总cDNA的数量和种类。另外，若mRNA过长，可能会形成二级结构，这时Oligo(dT ) Primer扩增也会有一定的困难。同样提示我们，在反转录时根据需要选择引物。
2、Random Primers即随机引物，常用长度是6碱基或9碱基，它是一种混合体，在每一个位置上四种碱基都可以随机的出现，如AATCGC,TTAAGCG等，如此可以有46或49种组合。
随机引物可以根据碱基情况结合到几乎所有的RNA上，包括mRNA、tRNA和rRNA。因此Random Primers适用于mRNA、tRNA和rRNA等所有RNA的反转录反应，适用于长的或具有发卡结构的RNA，对物种没有限制，病毒、细菌、植物、动物等都可使用。
3、目前有的公司和实验室提倡Oligo(dT)和Random Primers混合使用，以此保障获得更为完整的cDNA。

3, polyA和oligo是什么？它在mRNA纯化和反转录中有什么作用

在mRNA纯化和反转录中有什么作用
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5~10mg RNA。其中 rRNA为75%~ 85%,tRNA占10%~16%，而mRNA仅占1%~5%，并且mRNA分子种类繁多，分子量大小不均一，表达丰度也不一样。
真核生物mRNA有特征性的结构，即具有5"端帽子结构（m7G）和3"端的poly(A)尾巴——绝大多数哺乳动物细胞的3"端存在20~300个腺苷酸组成的poly(A)尾，通常用poly(A+)表示，这种结构为真核mRNA分子的提取、纯化，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。
一般mRNA分离纯化的原理就是根据mRNA 3" 末端含有多poly(A)尾巴结构特性设计的。当总RNA流经寡聚（dT）（即oligo(dT)）纤维素柱时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异地吸附在oligo(dT)纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA可被洗下，经过两次oligo(dT)纤维素柱，即可得到较纯的mRNA。

相关概念

扩增

扩增（amplification）其原意是作放大(率、系数、倍数、作用等)、扩大和扩充等。

RNA

核糖核酸（缩写为RNA，即Ribonucleic Acid），核糖核酸存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。 RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T。 2018年5月，湖南大学生物学院病原生物学与免疫学研究所团队新发现了一种免疫抵抗RNA病毒的工作机制。

引物

引物，是指在核苷酸聚合作用起始时，刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子，与反应物以共价键形式连接，这样的分子称为引物。引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。

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