标记寡核苷酸探针 做原位杂交的探针怎么设计

2019-06-28 18:02:34 来源：朵拉利品网

1, 做原位杂交的探针怎么设计

1.探针分为好多种，你要先决定你用何种，是RNA探针还是DNA探针，杂交时，RNA-RNA结合的稳定性要比DNA-RNA好，所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点；DNA探针背景稍微深一些，不过也可以，标记方法比前者简单一些，另外还有寡核苷酸探针，此类探针分子量小，通透性好，但就是标记的敏感性不高。
2.原位杂交相比免疫组化，定位相对准确，但如果蛋白在间质中发挥作用，原位杂交就检测不出来了，结合图像分析，原位杂交也可以对目的基因的转录半定量。
3.首先是标本对照，这个包括阳性对照和阴性对照；第二个是探针对照，主要是明确探针的特异性；第三个是探针正义连阴性对照，第四个未标记探针竞争抑制；第五个不含探针的阴性对照；第六个质粒对照，第七个无关探针对照。
4.若要定量，该试验不可行，还是作Northern，若要显示形态、定位，最好结合免疫组化。

2, 寡核苷酸探针杂交的分子基础是什么？

watson,crike的DNA双螺旋模型。
如果是填空什么的这就够了。如果是论述大题的话（这个题目还不算大），我这里就不具体论述了简单的介绍一下论述思路吧。
（毕业多年，好久没学习了，具体的也说不太清楚了。唯记得上学的时候论述DNA双螺旋模型是整个分子生物学的基础一题，貌似还基本拿了满分）
首先：什么事寡核苷酸探针杂交，分子过程。这样就可以为论述其分子基础提供背景和素材；
其次：将DNA双螺旋模型是什么，有什么内容，太精确的不记得了，大致记得是可分为3点，1. 核酸单链，2. 两条链（不是3条或几条链聚合，双螺旋模型之前确实有人提出了DNA存在形式的3链结合模式），同时碱基互补配对；3. 扭转折叠成双螺旋结构；
最后：将DNA双螺旋模型和寡核苷酸探针杂交相结合，杂交过程都是以双链互补结合为基础的；

相关概念

探针

探针是一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500bp），用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷-32）、萤光染料或者酶（如辣根过氧化物酶）标记成为探针。磷-32通常被掺入组成DNA的四种核苷酸之一的磷酸基团中，而荧光染料和酶与核酸序列以共价键相连。

RNA

核糖核酸（缩写为RNA，即Ribonucleic Acid），核糖核酸存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。 RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T。 2018年5月，湖南大学生物学院病原生物学与免疫学研究所团队新发现了一种免疫抵抗RNA病毒的工作机制。

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