oligo Oligo Primer和Random Primers的区别

2019-06-28 18:01:59 来源：朵拉利品网

1, Oligo Primer和Random Primers的区别

1、Oligo(dT ) Primer也可称为寡聚胸腺嘧啶引物，是只有胸腺嘧啶组成的寡居核苷酸链，长度范围在10~20个碱基之间，常用的Oligo(dT )Primer有15碱基、16碱基和18碱基。
Oligo(dT ) Primer利用了碱基互补配对的原则以及mRNA含有poly(A)尾巴的特点，巧妙设计而成。由于这个特点，使得Oligo(dT ) Primer只能和mRNA配对，并在适宜的条件下完成反转录。原核生物的RNA，真核生物的rRNA和tRNA无poly(A)尾巴，因此用Oligo(dT ) Primer作为反转录引物时，这些RNA均不能作为模板。这限制了反转录后获得的总cDNA的数量和种类。另外，若mRNA过长，可能会形成二级结构，这时Oligo(dT ) Primer扩增也会有一定的困难。同样提示我们，在反转录时根据需要选择引物。
2、Random Primers即随机引物，常用长度是6碱基或9碱基，它是一种混合体，在每一个位置上四种碱基都可以随机的出现，如AATCGC,TTAAGCG等，如此可以有46或49种组合。
随机引物可以根据碱基情况结合到几乎所有的RNA上，包括mRNA、tRNA和rRNA。因此Random Primers适用于mRNA、tRNA和rRNA等所有RNA的反转录反应，适用于长的或具有发卡结构的RNA，对物种没有限制，病毒、细菌、植物、动物等都可使用。
3、目前有的公司和实验室提倡Oligo(dT)和Random Primers混合使用，以此保障获得更为完整的cDNA。

3, polyA和oligo是什么？它在mRNA纯化和反转录中有什么作用

在mRNA纯化和反转录中有什么作用
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5~10mg RNA。其中 rRNA为75%~ 85%,tRNA占10%~16%，而mRNA仅占1%~5%，并且mRNA分子种类繁多，分子量大小不均一，表达丰度也不一样。
真核生物mRNA有特征性的结构，即具有5"端帽子结构（m7G）和3"端的poly(A)尾巴——绝大多数哺乳动物细胞的3"端存在20~300个腺苷酸组成的poly(A)尾，通常用poly(A+)表示，这种结构为真核mRNA分子的提取、纯化，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。
一般mRNA分离纯化的原理就是根据mRNA 3" 末端含有多poly(A)尾巴结构特性设计的。当总RNA流经寡聚（dT）（即oligo(dT)）纤维素柱时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异地吸附在oligo(dT)纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA可被洗下，经过两次oligo(dT)纤维素柱，即可得到较纯的mRNA。

相关概念

mRNA

信使RNA是由DNA的一条链作为模板转录而来的、携带遗传信息的能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸。

dT

DataTechnology 数据处理技术

纯化

纯化镇位于博兴县东北部，滨州、东营两市交界处，是黄河三角洲开发的重要区域之一。纯化镇32个行政村，人口2.4万，版图面积84平方公里，耕地8万亩。广袤的土地、丰富的资源及充盈的劳动力，为农业开发和农副产品深加工提供了广阔的前景。

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