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知识中心微生物快速检测技术发展现状 微生物快速检测技术
2020-03-19 09:20:50
来源：朵拉利品网
1, 微生物快速检测技术
1 即用型纸片法3M公司的perrifilmTM Plate系列微生物测试片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数。由RCP Sci-entific Inc公司开发上市的Regdigel系列，除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门菌、葡萄球菌的产品 ，这两个系列的产品与传统检测方法之间的相关性非常好。2、PCR 技术4 基因探针技术选择、鉴定用培养基法在培养基中加入特异性的生化反应底物、抗体、荧光反应底物、酶反应底物等，可使目标培养物的选择、分离、鉴定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP + RPF （兔血浆+纤维蛋白原）培养基，可在24 h内鉴定金黄色葡萄球菌[ 8 ] 。Merk公司的chro2mocult Coliform Agar培养基上，大肠杆菌为墨绿色至紫色菌落，沙门菌为淡绿色至蓝绿色菌落。柠檬酸杆菌和克雷伯杆菌为橙红色至红色菌落， 其他肠道菌为无色菌落[ 9 ]。5 ATP生物发光法是近年发展较快的一种用于食品生产加工设备洁净度检测的快速检测方法。利用ATP生物发光分析技术和体细胞清除技术，测量细菌ATP和体细胞ATP， 细菌ATP的量与细菌数成正比，用ATP生物发光分析技术检测肉类食品细菌污染状况或食品器具的现场卫生学检测，都能够达到快速适时的目标[6、 细菌直接计数法主要包括流式细胞仪（ flow cytometry, FCM）和固相细胞计数（ solid phase cytometry, SPC）法。FCM通常以激光作为发光源，经过聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。光散射信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的强度则代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，由此可通过仪器检测散射光信号和荧光信号来估计微生物的大小、形状和数量。流式细胞计数具有高度的敏感性，可同时对目的菌进行定性和定量[ 18 ]。目前已经建立了细菌总数[ 19 ]、致病性沙门菌、大肠埃希氏菌[ 20 ]等的FCM检验方法。固相细胞计数可以在单个细胞水平对细菌进行快速检测[ 21 ]。滤过样品后，存留的微生物在滤膜上进行荧光标记，采用激光扫描设备自动计数。每个荧光点可直观地由通过计算机驱动的流动台连接到ChemScan上的落射荧光显微镜来检测，尤其对于生长缓慢的微生物，检测用时短使该方法明显优于传统平板计数法
3, 微生物检测技术的内容简介
近年来，我国科研院所、高等院校就食品安全检测技术的研究与开发取得了明显的进展。 色谱检测技术的研究与应用普遍发展。色谱法创立已有近100年的历史，但一直到20世纪40年代中期，仍然是人们所采用的唯一一种色谱方法。1952年，气相色谱法被提出，使色谱法的发展前进了一大步，由于应用面广泛而受到人们的重视。目前，气相色谱和高效液相色谱已作为色谱分析化学技术在食品安全检测中广泛应用。借助高效液相色谱对食品中生物胺及其产生菌珠检测方法的研究，以及采用高效液相色谱仪---光电二极管阵列检测器作为检测手段，可以对食品中有害的色素苏丹红和4种四环素类抗生素定性定量的分析。生物检测技术研究与应用广泛开展。以PCR基因扩增技术、免疫学技术和生物芯片技术为代表的生物检测技术近年来在食品安全检测中蓬勃发展。传统的微生物检测方法主要依赖于微生物的富集培养、选择性分离和生化鉴定，操作烦琐、时间冗长、检出效率及灵敏度低、容易出现假阴性。使用PCR多聚酶链式反应检测技术，使DNA在体外合成放大可以快速地在体外扩增任何DNA，以检测微量有害成分。酶联免疫吸附法（简称ELISA）始于20世纪70年代，是一种把抗原和抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的检测技术。随着单克隆抗体技术的发展应用及免疫试剂盒的商业化，ELISA已广泛应用于食品分析检测中。这些方法前处理步骤复杂、费时费力、设备昂贵、不适宜大量样品现场检测的问题，采用这种方法，旨在快速检测半抗原，方法简便，灵敏度高。基因芯片技术是分子生物学技术与芯片技术相结合产生的一项高新技术。基因芯片制备及检测流程，是利用原位合成法或将已合成好的一系列寡核甘酸以预先设定的排列方式固定在固相支持介质表面，形成高密度的寡核甘酸的阵列，样品与探针杂交后，由特殊的装置检出信号，并由计算机进行分析得到结果，其在转基因食品及食品中的微生物的检测有广泛的运用。除上述之外，还有利用发光细菌发光原理，发光细菌在接触农产品（12.90,0.70,5.74%，吧）中致毒污染物后发光受抑制的现象，采用二次多因子回归，运用旋转组合设计和统计学方法，运用SAS和MINITAB软件构建了一套发光细菌法多污染混合物的联合毒性快速检测方法，此法可揭示多种农产品污染物共存时产生的联合毒性作用以及综合生物毒性和主因子作用。光学检测技术的研究与运用迅猛发展。共振光散射技术因其灵敏度好、实验仪器简单、检测方便等优点而备受分析化学研究者青睐。在食品安全检测及其生化药物分析中有广泛的用途，应用化学发光现象在食品安全检测中的运用研究近年来也屡有报道。利用低温等离子体辉光几种特性来检测食品中有毒物质的新方法，使常规的食品安全检测方法也有了突破。除此之外，近红外光谱技术在果蔬、肉制品检测及其他方面都有独到的优势和广阔的发展前景。快速检测技术与样品前处理技术的突破，是当前食品安全检测技术的研究热点。食品安全检测普遍存在检验程序复杂、检测周期漫长、检测成本昂贵、检验人员专业素质要求较高等特点，大大限制了现场监督和通关检验的效率。时效性困扰着食品安全检测作用的充分发挥。近年来，快速检测技术研究颇为广泛，如利用超声波快速检测仪具有非破坏性、精确、设备低廉、能够快速对高浓度液体和光不透明材料进行检测，如牛奶成分的分析检测；另外，根据抗体胶体金与被检测物结合形成稳定的肉眼可见结合物，在一定波长范围内具有最大吸收峰实现胶体金的定量检测的原理，快速检测食品中鼠疫耶尔森菌也有报道。食品安全检测分析存在两大问题：一是样品前处理技术，二是分析检测技术，其中样品前处理技术是前置的关键技术。由于食品基体复杂，有害污染物含量极微，同时越来越严格的最大残留限量标准对分析方法的检出限提出了更高要求，使得复杂的食品基体中有害残留的分析需要更为有效的前处理方法。样品前处理是目前食品分析较复杂和最薄弱的环节，因此成了较热门的前沿研究课题
名词解释
检测
用指定的方法检验测试某种物体（气体、液体、固体）指定的技术性能指标。适用于各种行业范畴的质量评定，如：土木建筑工程、水利、食品、化学、环境、机械、机器等等。
ATP
腺嘌呤核苷三磷酸又称腺苷三磷酸，简称ATP，是一种不稳定的高能化合物，由1分子腺嘌呤，1分子核糖和3分子磷酸基团组成。 腺苷三磷酸（ATP adenosine triphosphate）是由腺嘌呤、核糖和3个磷酸基团连接而成，水解时释放出能量较多，是生物体内最直接的能量来源。
荧光
荧光（fluorescence）是一种光致冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出出射光（通常波长比入射光的的波长长，在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。一般以持续发光时间来分辨荧光或磷光，持续发光时间短于10-8秒的称为荧光，持续发光时间长于10-8秒的称为磷光。在日常生活中，人们通常广义地把各种微弱的光亮都称为荧光。
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