高效液相色谱仪 高效液相色谱仪在使用时应注意什么

2019-06-26 21:04:56 来源：朵拉利品网

1, 高效液相色谱仪在使用时应注意什么

1、在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法项下对溶剂的要求。
2、各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变。
3、一般色谱图约于20分钟内记录完毕，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5%甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
5、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱。
6、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围。
7、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。
高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
参考资料来源：百度百科-高效液相色谱

2, 高效液相色谱仪的工作原理？

高效液相色谱仪工作原理；高压泵将贮液罐的流动相经进样器送入色谱柱中，然后从检测器的出口流出，这时整个系统就被流动相充满。当欲分离样品从进样器进入时，流经进样器的流动相将其带入色谱柱中进行分离，分离后不同组分依先后顺序进入检测器，记录仪将进入检测器的信号记录下来，得到液相色谱图。
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送，色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万），同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
高效液相色谱仪配置高压二元泵或者低压四元泵，而泵的冲程体积以及混合器的体积大小，均会对色谱基线噪音水平产生影响，特别是在梯度洗脱的时候。一般地泵的冲程体积越小以及混合器的体积相对越大，由输液造成的脉冲相对越小，对于梯度变化的响应能力越高，基线越平缓，
在应用二元泵的时，需要注意的是，当二元混合中的其中一元流动相的比例小于5%的时候，特别是在使用正相等度洗脱对一些医药中间体及终产品进行手性拆分的时候，最好使用单泵预混合的方式。避免由于泵在低比例时泵液精度相对较差，而导致色谱基线出现冲程相关峰，
参考资料来源；百度百科--高效液相色谱仪

3, 高效液相色谱仪的特点？

高压——压力可达150~300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
高速——流速为0.1~10.0 mL/min。
高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

4, 进口的高效液相色谱仪一般是什么价格

从15w到50w不等，主要看你自己需求和配置的组件
现在的LC一般都是使用的积木式，自由选择组件，如果只是一个最简单的低压泵+手动进样+普通紫外检测器，10多w就够了
泵有高压低压，等度梯度之分，之后还有在线脱气机（不必须），进样器有手动自动之分，光自动进样器价格就10多w，然后柱温箱大概5w（不必须，或者国产5千块效果一样），检测器有紫外、二极管阵列、荧光等，可以配其中的1个或多个，然后工作站，用原厂的一般在5w以上，国产的工作站3,4千块钱也能用
所以，应该先根据你有多少钱再来选配置
品牌的话，第一选沃特斯，第二安杰伦，第三岛津，其他牌子不考虑，
因为就算它质量有多好，但是再好的仪器也会出问题，所以仪器更重要的是看售后和备品附件的易购性，上述这几家公司在中国营销和售后都是做得不错的，最好是当地有哪家公司的分公司或办事处就买哪家的

5, 高效液相色谱仪有哪几种 是怎么分的都？

高效液相色谱仪分为分析型和制备型两种，按流量大小分类。
您说的10A,15A，是指的日本岛津SHIMADZU品牌的LC10ATvp型和LC-15A型，前者已经停产，15A是10A的升级换代产品。
常用的实验室液相色谱仪HPLC
进口品牌有日本岛津SHIMADZU，美国沃特斯WATERS，美国戴安，美国安捷伦Agilent，美国热电，美国珀金埃尔默PE，德国诺尔等
国产品牌有北京普元精仪、北京普析、北京东西电子、北京创新通恒、北京瑞利、上海天美、上海通微、浙江福立、江苏天瑞等

6, 高效液相色谱仪使用中需注意的几个问题？

1. 色谱柱中的流动相是否会排干
不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。
2. 色谱柱变干
另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
3. 使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接头
如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。PEEK管路容易连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK遇到上述溶剂会变脆。另一个西药考虑的因素是压力限。不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。
使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。
4. 预防液相泵的故障
处于良好操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳；保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。 要保持泵的良好操作性能，必须维护系统的清洁，保证溶剂和试剂的质量，对流动相进行过滤和脱气.下面列出预防泵故障的几项措施：
1）用高质量试剂和HPLC级溶剂；
2）过滤流动相和溶剂；
3）脱气；
4）每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液；
5）不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中；
6）定期更换垫圈；
7）需要时加润滑油；
8）查阅有关泵操作手册中的其它建议。
9）为了使故障发生后尽快排除，平时应常备密封、单向阀（入口与出口）、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。更多相关咨询，分析资料请参考光谱标准物质

相关概念

液相色谱仪

利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。

岛津

【词条一】　　日本姓氏。

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